Date

2011-12-31

Author

Adalı, Orhan

Metadata

Show full item record

This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.

Item Usage Stats

143
views

0
downloads

Cite This

Çeşitli ilaçlar, endüstriyel kimyasallar, pestisitler veya gıda katkı maddeleri gibi ksenobiyotikler, vücuda girdiklerinde parçalara ayrılarak veya değişime uğrayarak vücuttan atılmaları için bir takım enzim sistemleri tarafından metabolize edilmeleri gerekmektedir. Bu enzim sistemleri bu kimyasal ajanların toksik etkilerini değiştirebildikleri gibi çeşitli ilaçların da etki mekanizmalarını etkileyebilmektedirler. Kimyasal ajanların karşılaştıkları ilk enzim sistemi genel olarak Faz I detoksifikasyon/aktivasyon sistemi olarak adlandırılmaktadır. Faz I sistemi içerisinde yer alan başlıca enzimlerden bir tanesi olan Flavin monooksijenazlar (FMO, EC 1.14.13.8) çeşitli teröpatik ilaçlar, pestisitler ve gıda katkı ürünlerini de kapsayan çok sayıda yabancı kimyasal maddenin oksidatif olarak metabolize edilmesinden sorumludurlar. Proje kapsamında çalışmaların ilk bölümünü bu araştırmada çalışma materyali olarak seçilen tüylü yakıotunun toplanması için gerçekleştirilecek olan arazi çalışmaları oluşturmaktadır. Öğütülmüş ve toz haline getirilmiş bitki örneklerinden 50 g alınarak 8 saat süreyle oda sıcaklığında, steril bi-distile su ile hareketli maserasyona tabi tutulacaktır. Son ürün enjeksiyon çalışmalarında kullanılmak üzere oksijen ile irtibatı olmayacak bir şekilde ambalajlanarak (N2 altında ) -20 ºC'de muhafaza edilecektir. Bu çalışma kapsamında kullanılacak olan 4 aylık yetişkin erkek Wistar Albino sıçanlar 3 farklı gruba ayrılacaktır; Kontrol I, hiç bir uygulama yapılmayacak, Kontrol II, bitki ekstresinin verildiği eş hacimde fizyolojik salin verilen ve EHT, Epilobium Hirsitum, (tüylü yakıotu YOT)'dan elde edilecek ekstrenin 37,5 mg/kg vücut ağırlığı olacak şekilde steril distile su çözünürek verildiği grup. Projenin 1. döneminde sıçan karaciğer dokuları kullanılarak mikrozomal fraksiyonlar izole edilecektir. Dokulardan elde edilen mikrozomal fraksiyonların protein miktarı tayini, BSA (sığır serum albümin) standart olarak kullanılarak mikro “Bicinchoninic Acid”-BCA metodu ile gerçekleştirilecektir. Kontrol sıçanlardan elde edilen mikrozomlar kullanılarak flavin monooksijenaz (FMO) enzimi için en iyi protein ekspresyonunun belirleneceği optimum SDS-PAGE ve Western Blot koşulları saptanacaktır. Flavin monooksijenaz3 (FMO3) protein ekspresyonu optimizasyon çalışmalarında sisteme yüklenecek olan uygun protein miktarı, sistemde kullanılcak uygun ayırıcı ve sıkılaştırıcı jellerin konsantrasyonları, western blot işleminde kullanılacak uygun birincil ve ikincil antikor konsantrasyonları belirlenecektir. Projenin 2. Kısmında optimizasyon çalışmaları sonucunda elde edilen bulgular doğrultusunda uygun protein miktarı, uygun ayırıcı ve sıkılaştırıcı konsantrasyonları, uygun primer ve ikincil antikorlar kullanılarak kontrol grubu ve Epilobium hirsutum enjekte edilmiş sıçanlarda FMO enziminin protein ekspresyonunda meydana gelebilecek olası değişimler saptanmaya çalışılacaktır.

URI

https://hdl.handle.net/11511/58827

Collections

Department of Biology, Project and Design