Date

1999-05-01

Author

İşcan, Mesude
Asu-hıjleh, Ali Awri

Metadata

Show full item record

This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.

Item Usage Stats

70
views

0
downloads

Cite This

1-kloro-2,4-dinitrobenzen (CDNB)'in ve 1,2-epoksi-3-(p-nitro-fenoxi) propan (EPNP)'in sitozolik GSTler ile in vitro glutatyon konjugasyonlan eşleşmiş insan normal ve tümör dokularında incelendi. Kontrol meme dokularında CDNB substratına karşı GST özgül aktivitesi 81.2 ± 71.9 nmole/dak/mg protein olarak, kanserli dokularda ise 145.0 ± 111.9 nmole/dak/mg protein olarak saptandı. EPNP substratına karşı GST özgül aktivitesi normal dokulardal9.8 ± 18.0 nmole/dak/mg protein ve tümörlü dokularda ise 27.5 ± 22.8 nmole/dak/mg protein olarak ölçüldü. Mann-Whitney testi kontrol ve tümör gruplarındaki CDNB-GST ve EPNP-GST aktiviteleri arsındaki farkın istatistiksel olarak anlamlı olduğunu göstermiştir. Substrat CDNB'e karşı ölçülen GST aktiviteleri 40 eş sitozolik fraksiyonda da görülmesine rağmen, sitozolik fraksiyonların %25 ( 40 numunenin 10'unda) inde substrat EPNP'e karşı aktivite görülmemiştir. EPNP'e karşı yüksek aktivite veren bir teta sınıfî enzimi olan GSTT1-1, insan kontrol meme dokularından %21 verim ve 28 kat saflaştırma faktörü ile; tümör dokularından ise % 39 verim ve 23 kat saflaştırma faktörü ile saflastınlmıştır. Saflaştırma protokolü, sırası ile, Sephadex G-100 kolonunda jel filtrasyonu, S-heksillglutatyon afinite kolon kromatografisi, hızlı akışlı DEAE- Sepharose anyon değiştirici, TSK esaslı tiyofilik resin (T-jel) ve Matrex jel Oranj A boya esaslı kolonlarda kromatografi ve kromatofoküslama kolon kromatografisinden oluşmaktadır. Enzim aktivitesinin saflaştırmanın son basamağında hızla düştüğü gözlenmiştir. Normal ve tümörlü meme dokularından yapılan saflaştırmalarda kolon kromatografi profillerinde farklılık gözlenmemiştir. Saflaştınlan GSTT1-1'in denenen bir çok GST substratlan arasından sadece EPNP, 4-NBC, CHP and DCM'e karşı anlamlı aktiviteler verdiği görülmüştür. Bu aktiviteler kontrol meme dokularından saflaştınlan GSTT1-1 için, sırasıyla 1540, 63, 7.2, 152 nmole/dak/mg protein ve meme tümörü dokularından saflaştınlan GSTT1-1 için sırasıyla 2170, 78, 9.3 ve 173 nmole/dak/mg protein olarak saptanmıştır. Saflaştınlmış kontrol ve tümör GSTT1-1 izozimlerinin substrat EPNP için Km değerleri sırasıyla 0.25 ve 0.33 mM olarak ve kofaktör GSH için Km değerleri ise 0.4 ve 5.&-mM olarak hesaplanmıştır. Her iki dokudan da saflaştınlmış GSTT1-1 izozimlerinin aîtünitelerinin molekül ağırlıklarının yaklaşık olarak 25.500 ve izoelektrik noktalarının da 6.6 civarında olduğu SDS-PAGE, IEF ve Western Blot analizleri ile gösterilmiştir, însan memesi normal ve kanserli dokularından saflaştırılan GSTT1-1 izozimlerinin arasında molekül ağırlıkları ve izoelektrik noktalan açısından bir ferkhhk olmadığı gözlenmiştir.

Subject Keywords

URI

https://hdl.handle.net/11511/95599

Collections

Department of Biology, Project and Design